| | 3M大肠杆菌/大肠菌群快速检验测试片操作以及判读 |
| 一、测试大肠杆菌/大肠菌群 操作方法 | |
| 1、未开封时，冷藏于≤8℃（≤46℉），并在保存期内用完，高温度时，凝固水可以排除，包装物最好于室温启开。 | 2、已开封的，将封口以胶带封紧。 |
| 3、保存再封的袋于≤25℃（≤77℉）和温度<50％，不要冷藏已开启的包装袋，并于一个月内使用完。 | 4、制备1：10和更大稀释的食物样品稀释液，称取或吸取食物样品，置入适宜的无菌容器内，如均质袋、稀释瓶、WhirlPak bag或者其他灭菌容器内. |
| 5、加入适量的无菌稀释液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4调PH7.2) 、0.1%的蛋白胶水(ISO方法6887) 、缓冲蛋白胶水(ISO方法6579) 、盐溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸馏水. 但不可用含有枸橼酸盐、bisulfite or thiosulfate的缓冲液. 因为它能抑止菌生长。 | 6、搅拌或均质样品
酸性样品的稀释液用INNaoH调PH6.5－7.5，对碱性样品的稀释液用IN HCL调PH6.5－7.5。 |
| 7、将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。 | 8、使用吸管将1ml样液垂直滴加在测试片的中央处。 |
| 9、细心将上层膜缓慢盖下，避免有气光泡产生，切勿使上层膜直接落下。 | 10、使用压板（平面底朝下）放置在上层膜中央处。 |
| 11、轻轻的压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转压板。 | 12、拿起压板，静置至少1分钟以使培养基凝固。 |
| 13、测试片的透明面朝上，可堆叠至20片，对有一定湿度养箱能保持最少份损失是需要的。 | 14、可目视及用标准菌落计数器或其它的照明放大镜计数，并可参考判读卡计算菌落数。 |
| 15、可以分离菌落作进一步鉴定，即掀起上层膜，由培养胶上挑取单个菌落。 | |
| 二、测试大肠杆菌/大肠菌群 判读方法 | |
| Petrifilm ColiformTM Coliform测试片含有VRB培养剂 (Violet Red Bile)，一种冷水可溶性的凝胶剂和四唑翁(tetrazollium)指示剂，可增强菌落计数效果。绝大多数E .coli（约占97%）能产生-葡萄糖甘酸酶与培养基中的指示剂反应，产生蓝色沉淀环绕在大肠杆菌菌落周围，表面覆盖的胶膜，可留住发酵乳糖的大肠菌群产生的气体，约有95%的大肠杆菌产生，形成蓝色或深蓝上菌落并有气泡相连接，气泡大小约为1个菌落直径。 AOAC和FDA细菌学分析手册（RAM）规定大肠菌群为革兰氏阴性杆菌，发酵乳糖产酸产气。大肠菌群菌落在Petrifilm CC测试片上生长产酸，PH指示剂使培养基颜色变深，在红色菌落周围有气泡者，为大肠菌群细菌。大肠杆菌鉴定，在不同国家可以有变更（见培养时间和温度部分指示）。 |
该测试片不能单独测定E.coli O157,像大多数其他E.conliform培养基一样,它没有专门指示是否有任何0157菌株的存在.
AOAC确认的方法:
E.coli=49(蓝色菌落带有气泡)
Total coliform=87(红色和蓝色菌落带有气泡) | No growth=0
注意图2到8 培养基颜色的变化,随着E.coliform菌数增多,培养基颜色变成暗红色或蓝紫色,背景的泡(沫)为培养基现象,不是大肠杆菌或大肠菌群生长结果,见方框1. |
E.coli connt=13
Total coliform count=28
Petrifilm Ec测试片菌落数适宜计数范围是15-150,不要计算圆形培养基外的菌落,因为泡棉上已不含选择性培养基.见圆圈! | E.coli count=3
任何蓝色菌落(蓝色到红蓝色)表明有E.coli存在,正面照明增强形成蓝色沉淀菌落的测定,圆圈1示为背面光照的红蓝菌落,圆圈2示为同一菌落的正面光照蓝色沉淀更明显些. |
E.coli count=17
Estimated total coliform count =150
测试片面积约为20cm2,当菌落数超过150 个,为了估计菌落数可选择其中一个或数个有代表性菌落的小方格(1cm2 )计算平均菌落数,再乘以20方可得到整个测试片上的菌落数
| Actual count～106
Petrifilm EC测试片菌落无法计数时至少有下列现象之一:
1.很多小菌落
2.有许多气泡
3.培养基的颜色变深,由红色到蓝紫色 |
Actual count～108
高数量的大肠杆菌可以引起长生区变成蓝紫色.
| Presumptive E.couli count～8
Estimated total coliform count～108
当大肠菌群数>108 时,一些大肠杆菌菌株可能产生少量气体和不明确的蓝色菌落.所有不带气泡的蓝色菌落和(或)蓝色环带,推定为大肠杆菌需计数,如有必要需挑取不带气泡的蓝色菌落,进行确认试验. |
Actual count～108
当有大量的非大肠菌群细菌如假单胞菌属细菌存在时,petrifilm EC 测试片培养基颜色呈黄色.
| Total coliform count=3
食物颗粒为不规则形状,且不带气泡. |
Total coliform count=78
气泡可有不同形状,气泡可使菌落撑散,使菌落轮廓似气泡,见圆圈1和2.
人为气泡可能是不当的操作所致,或是来自样品内的气体,它们成不规则形状,且不与菌落相连接.见圆圈3
| 例如1-10示为不同形状气泡与菌落连接情况，所有菌落应记数。 |
