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喹噁啉类药物残留测定方法——高效液相鱼谱法

时间:2023-03-24 23:59:40来源:food栏目:食品快速检测 阅读:

 

喹噁啉类药物残留测定方法——高效液相鱼谱法

[db:作者] / 2022-12-21 00:00

(3)高效液相鱼谱法( high performance liquid chromatography, HPLC)

喹噁啉类药物及其代谢物多属中等极性,大多选用反相HPLC分离,流动相主要选用甲醇、乙腈和水,通过调节三者比例和梯度条件,各药物可得到较好的分离;同时,流动相的pH影响待测物的存在形态,需要注意选择合适的pH范围。本类药物及其代谢物的共平面共轭结构,具有紫外吸收特性。QCA和MQCA都有三个较强的吸收峰,吸收波长分别为204nm、 245nm和320nm;其他几种药物的UV-Vis吸收图见图15-3。因而,本类药物HPLC检测最常用的检测器为紫外检测器(ultraviolet detector,UVD)和二极管阵列检测器(diode-array detector,DAD;photo-diode array detector,PDA)。

图15-3几种喹噁啉类药物的UV-Vis光谱图

(a)CYX;(b)BDCYX

1)直接测定

Nasr等优化和验证了一个测定鸡肉、鸡肝、牛肉、牛肝和牛奶中CBX和OLQ残留量的HPLC方法。采用C18柱分离,以10%乙腈和含0.3%三乙胺的0.02mol/L磷酸缓冲液(pH4)作为流动相,梯度洗脱,在373nm波长检测。该方法能够在四分钟能完成分析测定,CBX和OLQ的回收率分别在89.2%~93.6%和93.0%~107.2%范围内。张小军等用HPLC测定动物组织中OLQ残留标示物MQCA。色谱柱为Sunfire C18柱(250 mm×4.6mm,5um),流动相为甲醇-1.0%甲酸(40+60,v/v),流速1.0mL/min,柱温30℃,进样量50μL,检测波长320nm。猪肉、牛肉、对虾和草鱼的回收率为82.1%~90.3%,LOQ为4.0μg/kg。 实验对同规格的ZORBAX SB-C18、Sunfire C18和X-Bridge C18三种色谱柱进行了比较,ZORBAX SB-C18和X-Bridge C18出峰较早,但有杂峰干扰,Sunfire C18出峰相对较晚,且分离效果好。实验还比较了甲醇-1%甲酸(40+60,v/v)、甲醇-0.5%甲酸(30+70,v/v)两组等度洗脱,以及甲醇、水和乙酸-乙酸钠缓冲液梯度洗脱,发现以甲醇-1.0%甲酸(40+60,v/v)作为流动相时,色谱峰形和灵敏度最好。

QCA和MQCA等代谢物与喹恶啉类药物原形极性差异较大,同一色谱条件不易操作,可以分别进样测定。Huang等测定鸡血液、肌肉、肝脏、肾脏和脂肪中CYX及其代谢物,HPLC色谱柱为ODS2(5um,250mm×4.6mm),流速1mL/min,色谱柱温度30℃。CYX和BDCYX的色谱检测条件为:0~8min,乙腈-水(15+85,v/v),紫外检测波长305nm;8~15min,流动相线性转化为乙腈-水(25+75,v/v),检测波长为280nm;而QCA的流动相为甲醇-水-甲酸(40+60+10,v/v),检测波长320nm。CYX和BDCYX的LOQ为0.025mg/kg(血和组织),回收率在73%~87%之间,日间RSD小于9.86%;QCA的LOQ为0.025mg/kg(血和内脏组织)和0.02mg/kg(肌肉);回收率为70%~87%,日间RSD为7.69%~11.43%。Zhang等用HPLC测定羊组织中的CYX、BDCYX和QCA。色谱柱为RP18(5um,4.6mm×250mm),流速1mL/min。CYX和BDCYX的流动相为乙腈-水,梯度洗脱,紫外检测波长分别为305nm和280nm;QCA的流动相为1%甲酸水-甲醇(6+4,v/v),检测波长为320nm。CYX的回收率为65%~79%,日间CV为6.7%~11.1%;BDCYX的回收率为70%~92%,日间CV为4.7%~15.9%;QCA回收率为70%~82%,日间CV为6.7%~11.1%;三种药物的LOD均为15 μg/kg, LOQ为25 μg/kg。Huang等用HPLC测定猪、鸡肉中QCT及其代谢物。色谱柱为Hyper sil ODS2(250mm×4.6mm),流速1mL/min,QCT流动相:甲醇-水(55+45,v/v),BDQCT 流动相:甲醇-水(7+3,v/v),MQCA流动相:1%甲酸水-甲醇(6+4,v/v),检测波长为:312nm(QCT)、320nm(BDQCT和MQCA)。该方法回收率为71%~86%,CV为4%~12%;LOQ为0.05mg/kg,LOD为0.025mg/kg。

当代谢物与药物原形同时进样测定时,可以采用梯度洗脱,或者在流动相中添加酸,以降低pH,并增加在反相色谱上的保留性能。梅景良等建立了鱼、虾中OLQ和MQCA的HPLC检测方法。色谱柱为Inertsil ODS-3 C18柱(250mm×4.6mm,5um),流动相由纯水、乙腈、甲醇和0.5%甲酸水组成,梯度洗脱,柱温30℃,进样量100μL,样品运行时间为20min,双波长检测(OLQ为372nm,MQCA为320nm)。鱼组织中OLQ和MQCA的LOD分别为6ugkg和10ug/kg,LOQ分别为20ug/kg和35μg/kg;虾中的LOD分别为4.5μg/kg和8μg/kg,LOQ分别为15ug/kg和30μg/kg。Zhang等测定猪尿中MQX及其4种代谢物:1-脱氧乙酰甲喹、4-脱氧乙酰甲喹、BDMQX和MQCA。5mL样品中加200μL甲醇和60μL四氯乙烷,超声波萃取4min,离心后HPLC测定。C18色谱柱(5um,4.6mm×250mm)分离,流动相为甲醇-乙腈-水(26+26+48,v/v,含0.1%三氟乙酸),流速1mL/min,进样量10μL,检测波长320nm。方法LOD为0.16~0.28μg/L,回收率为72.0%~91.3%,CV小于5.2%。Wu等检测动物肌肉、肝脏和鱼肉中MQCA和QCA,用Eclipse XDB C18色谱柱(250mm×4.6mmid.)分离,柱温30℃,流动相为甲醇-1%甲酸(35+65,v/v,pH2.7~3.1),流速1.0mL/min,检测波长为320nm。QCA和MQCA的CCa为0.7~2.6μg/kg,CCβ为1.3~5.6μg/kg,回收率为70%~110%,CV小于20%。

2)柱后衍生测定

1-脱氧卡巴氧和4-脱氧卡巴氧主要采用HPLC柱后衍生方法测定。Aerts等测定猪肝、肌肉、肾脏中CBX、BDCBX、1-脱氧卡巴氧和4-脱氧卡巴氧残留,采用柱切换HPLC系统-柱后衍生化检测。富集柱为C18 Corasil(60mm×4.6mm,3~5.0um),流动相为水,流速0.6mL/min;色谱分析柱为C18柱(200mm×3mm,5um),流动相为0.01mol/L乙酸钠缓冲液(乙酸调节pH6)-乙腈(85+15,v/v),流速0.5mL/min;柱后衍生试剂为0.5mol/L氢氧化钠溶液,流速0.3mL/min,衍生化反应管(2m×0.5mm);420nm检测。时间序列为:0min,进样和淋洗;20min,切换六通阀柱反冲,检测器自动调零;25min,复位六通阀;35min,结束。该方法各药物的LOD为0.5~1μg/kg(CBX)、2~3μg/kg(BDCBX)、1~2μg/kg(1-脱氧卡巴氧和4-脱氧卡巴氧);回收率在81%~87%之间,CV为4%~10%。但是,在这种色谱条件下,QCA不保留,出峰过早与溶剂杂质峰重合而无法检测。Binnendjk等也采用柱切换HPLC-柱后衍生的方法测定动物产品中CBX及其代谢物。富集柱为Sep-Pak C18(10mm×2.1mm),流动相为水,流速0.3mL/min;色谱分析柱为Chromaspher C18 (100mm×3mm),流动相为0.01mol/L乙酸钠缓冲液(乙酸调pH6)-乙腈(86+14,v/v),流速0.5mL/min;柱后衍生试剂为0.5mol/L氢氧化钠溶液,流速0.23mL/min,衍生化反应管(2m×0.5mm);390nm检测。时间序列为:0min,进样和淋洗;20min,切换六通阀柱,检测器自动调零;25min,复位六通阀;35min,结束。猪肾、肌肉和肝中CBX的LOD为0.5~1μg/kg,BDCBX为0.5~2μg/kg;回收率为83%~95%,RSD小于14%。该法还适用于d血浆和蛋中CBX的测定,回收率在70%~80%之间。

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